Контроль клеточного цикла
Участники контроля клеточного цикла
Контрольные точки клеточного цикла
Контроль различных этапов клеточного цикла
Циклин-зависимые киназы
Циклины
Субстраты циклинов
APC комплекс
Ингибиторы комплексов Cdk-циклин
Участники контроля клеточного цикла
Клеточный цикл контролируется путем взаимодействия трех типов
белков: циклинзависимые киназы (Cdk), циклины
- белки, взаимодействующие с Cdk c образованием комплексов
и ингибиторы комплексов Cdk-циклин.
Циклинзависимые киназы (Cdk) - ферменты фосфорилирующие другие
белки, изменяют их функцию. Клеточный цикл контролируется изменением
активности Cdk, которая регулируется периодическим образованием
и распадом их регуляторных субъединиц - циклинов. Смена синтезов
и разрушений различных циклинов обеспечивает переходы и протекания
различных фаз клеточного цикла. При этом концентрация Cdk
постоянна в течении всего клеточного цикла. В разные фазы
клеточного цикла образуются разные циклины, которые связываясь
с Cdk образуют различные Cdk-циклиновые комплексы. Эти комплексы
регулируют разные фазы клеточного цикла и поэтому называются
G1-, G1/S- , S- и М-Cdk (рис.1).
рис.1 Концентрации различных комплексов Cdk-циклин
в клеточном цикле.
Контрольные точки клеточного цикла
1. Точка выхода из G1-фазы, называемая
Старт - у млекопитающих и точкой рестрикции
у дрожжей. После перехода через точку рестрикции R в конце
G1 наступление S становится необратимым, т.е. запускаются
процессы ведущие к следующему делению клетки.
2.
Точка S – проверка точности репликации.
3.
Точка G2/M-перехода – проверка завершения репликации.
4. Переход от метафазы к анафазе митоза.
Контроль различных этапов клеточного
цикла
ARC подавляет S- и M-циклины и не подавляет G1/S-циклины.
В G1-фазе работают различные ингибиторы Cdk.
Внутренние и внешнии сигналы приводят к образованию G1/S-
и S-циклинов и активации G1/S–Cdks.
Активность G1/S–Cdk увеличивается потому что G1/S циклины
не атакуются APC и потому что G1
Cdk ингибиторы так же не действуют на G1/S–Cdks
(у мух и дрожжей) или удаляются от G1/S–Cdks другими
механизмами (у млекопитающих).
S-Cdk инактивирует ингибиторы Cdk и подавляет ARC, которые
в G1-фазе подавляли S-Cdk. S-Cdk фосфорилируют
различные белки, что ведет к началу дупликации ДНК и S-фазы.
После начала S-фазы S/G1-Cdk обеспечивают собственную
инактивацию.
В конце S-фазы, в G2-фазе начинают накапливаться
М-Cdk, приводящая к вступлению клетки в митоз. М-Cdk активирует
ARC-комплекс, управляющий метафазно-анафазным переходом. Основная
функция ARC-комплекса состоит в разрушении когезинов, приводящее
к началу расхождения хромосом
Циклин зависимые киназы Cdk1-5 в клетках млекопитающих
Cdks активируется при связывании с циклинами (так же как фосфориляция
и дефосфориляция киназ). Cdks-фосфорилируют белки участвующие
в кл цикле
M-phase Cdk (M-Cdk) запускают каскад белковых фосфориляций,
запускающих М-фазу к.ц. (конденсация хромосом, разрушение
ядра, перестройка АГ иЭР, потеря адгезии с большинством других
клеток и внеклеточному матриксу, реорганизация цитоскелета)
anaphase-promoting complex (APC) регулятор митоза – инициация
разделения и расхождения хромосом и инактивация М-Cdk в конце
митоза
При выходе из G0 под действием факторов роста начинает
синтезироваться Cdk2-циклинD: распознает в-ва, регулирующие
ферменты синтеза белков, необходимых для репликации ДНК. В
это же время выявляются Cdk4-циклинD, и Cdk5циклинD
циклин-cdks
запускает М-стадию кц, деградация циклина снижает активность
cdks
Cdk2-циклинE появляется в G1 и достигает max
на границе G1-S, после чего его концентрация
резко снижается
Cdk2-циклинА появляется в промежутке G1-S и присутствует
в высокой концентрации на протяжении S
Сdk2-циклинB в конце G2 до М – резко разрушается
в каждой стадии синтезируются свои циклины M-циклины запускают
события митоза, G1/S-циклины – связывают цзк
в конце G1 подготавливает кл к S-фазе, S-циклины
– связывают цзк, запуская репликацию, G1-циклины
обеспечивают прохождение через точку рестрикции.
Регуляция репликации
Перед началом репликации Sc ORC-комплекс (origin recognition
complex) садится на ori - точку начала репликации. Cdc6 представлен
во всем клеточном цикле, но его концентрация возрастает вначале
G1, где он связывается c ОRC комплексом, к которому затем
присоединяются Mcm белки с образованием pre-replicative complex
(pre-RC). После сборки pre-RC клетка готова к репликации.
Для инициации репликации S-Cdk соединяется с протеинкиназой
(?), которая фосфорилирует pre-RC. При этом Cdc6 диссоциирует
от ОRC после начала репликации и фосфорилируется, после чего
убиквитинируется SCF и деградирует. Изменения в pre-RC препятствуют
повторному запуску репликации. S-Cdk так же фосфорилирует
некоторые Mcm белковые комплексы, что запускает их экспорт
из ядра. Последующая дефосфориляция белков вновь запустит
процесс образования pre-RC.
Регуляция митоза
В эмбриональных клетках синтез М-циклина постоянен во всем
клеточном цикле и накопление его происходит из-за уменьшения
деградации. У большинства клеток М-циклин синтезируется во
время G2 и М-фаз. Накопление циклина ведет к накоплению M-Cdk.
Cdk ингибируется, фосфорилируясь протеинкиназой Wee1. Активация
Cdc25 в поздней G2 дефосфорилирует M-Cdk, так же происходит
репрессия Wee1. Две протеинкиназы фосфорилируют Cdc25 – Polo
kinase и M-Cdk. M-Cdk так же фосфорилирует и ингибирует Wee1.
Способность M-Cdk активировать свой собственный активатор
(Cdc25) и ингибировать свой собственный ингибитор (Wee1) предполагает,
что активация M-Cdk в митозе резко усиливается при наличии
такой позитивной обратной связи. Малое количество активированных
Cdc25 активируют M-Cdk, которые активирует еще больше Cdc25
и супрессируют Wee1. Это приводит к большей дефосфориляции
M-Cdk и активации и тд. Такой механизм обеспечивает полную
активацию всех M-Cdk
Фосфорилирование ламинов M-Cdk приводит к их деградации. М-Cdk
фосфорилирует несколько субъединиц конденсинов, запуская конденсацию
хромосом.
M-Cdk фосфорилирует различные белки, запуская реорганизацию
микротрубочек и другие события ведущие к организации веретена
деления.
Циклин-зависимые
киназы
вид | название | синоним | размер | функция |
S.cerevisiae | Cdk1 | Cdc28 | 298 | все стадии клеточного цикла |
S.pombe | Cdk1 | Cdc2 | 297 | все стадии клеточного цикла |
D.melanogaster |
Cdk1 |
Cdc2 Cdc2c Cdk4/6 |
297 314 317 |
M G1/S, S, возможно М G1 обеспечивает рост |
X.laevis | Cdk1 Cdk2 |
Cdc2 |
301 297 |
M S, возможно S |
H.sapiens | Cdk1 Cdk2 Cdk4 Cdk6 |
Cdc2 |
297 298 303 326 |
M G1/S, S, возможно М G1 G1 |
В животных клетках имеются, по крайней мере, 7 различных
Cdk. Cdk1,2,4,6 напрямую участвуют в регуляции клеточного
цикла, тогда как остальные фосфорилируют другие Cdk и называются
Cdk-активирующие киназы (CAK).
Cdk7,8,9 являются регуляторами РНК полимеразы II. Cdk5 участвует
в дифференцировке нервных клеток.
У дрожжей Sc и Sp все события клеточного цикла контролируются
одной Cdk1. У многоклеточных организмов события контролируются
Cdk1 и Cdk2. Также у высших эукариот имеются Cdk4 и Cdk6
которые регулируют клеточный цикл в ответ на внеклеточные
сигналы.
Cdk фосфорилируют сотни различных белков по сериновым (S)
или треониновым (T) аминокислотным остаткам. Cdk узнает
мотиф другого белка по которому необходимо фосфорилировать:
[S/T*]PX[K/R], где S/T*- место фосфорилирования, X – любая
аминокислота, K/R-основные аминокислоты лизин (K) или аргинин
(R).
В отсутствии циклина активный центр Cdk заблокирован.
Cdk состоит из нескольких доменов: Т-петля (инактивирующая
петля) – закрывает активный центр в отсутствии циклина.
L12 helix, PSTAIRE helix.
Циклины
Вид | G1 | G1/S | S | M |
S.cerevisiae | Cln3 (Cdk1) |
Cln1,2 (Cdk1) |
Clb5,6 (Cdk1) |
Clb1,2,3,4 (Cdk1) |
S.pombe | Puc1? (Cdk1) |
Puc1 Cig1?, (Cdk1) |
Cig2, Cig1? (Cdk1) |
Cdc13 (Cdk1) |
D.melanogaster | cyclin D (Cdk4) |
cyclin E (Cdk2) |
cyclin E, A (Cdk2,1) |
cyclin A, B, B3 (Cdk1) |
X.laevis | cyclin E (Cdk2) |
cyclin E, A (Cdk2,1) |
cyclin A, B (Cdk1) |
|
H.sapiens | cyclin D1,2,3 (Cdk4,6) |
cyclin E (Cdk2) |
cyclin A (Cdk2,1) |
cyclin B (Cdk1) |
Циклины - цитоплазматические белки. Разрушение циклинов
происходит в протеосомах (см. обзор Протеасомы). Циклин
B – белок киназный домен, регуляторная субъединица. Начинает
синтезироваться в G1, достигает max в S и ранней профазе
и быстро разрушается в начале анафазы М. Когда концентрация
регуляторной субъединицы возрастает – активируется киназный
домен. Фосфорилирование специфических белков приводит к
компактизации х-м, разрушению ядерной об-ки и сборке веретена.
Циклин разрушается в протеасомах. Сигнальная послед-ть из
8-10 а-кт –блок разрушения - узнается распознающим белком,
убиквитинлигаза присоединиет убиквитин (76а-кт) к остаткам
лизина, который полиUb и узнается РНК-белковым комплексом
протеасомой. Фосфатаза переводит распознающий белок в неактивное
состояние, а циклин фосфорилирует переводя в активное ?чем
больше циклина, тем быстрее он разрушается.
Циклин фосфорилирует сериновые и треониновые остатки ламинов
вызывая их деполимеризацию, фосфорилирует гистон H1, участвует
в фосфорилировании блокирующим везикулярный транспорт –
разрушение ЭПР и АГ, фосфорилирует участок легкой цепи миозина,
ингибируя АТФ-азную активность и связывание с F-актином
– блокировка цитокинеза в раннем митозе. После разрушения
циклина белки дефосфорилируются.
Циклины – активаторы Cdk. Циклины, так же как и Cdk вовлечены
в различные, помимо контроля клеточного цикла, процессы.
Циклины разделяются на 4 класса в зависимости от времени
действия в клеточном цикле: G1/S, S, M и G1 циклины.
G1/S циклины (Cln1 и Cln2 у S. cerevisiae, циклин E у позвоночных)
достигает максимальной концентрации в поздней G1-фазе и
падает в S-фазе.
G1/S cyclin–Cdk комплекс запускает начало репликации ДНК
выключая различные системы подавляющие S-phase Cdk в G1-фазе
G1/S циклины также инициируют дупликацию центросом у позвоночных,
образование веретенного тела у дрожжей. Падение уровня G1/S
сопровождается увеличением концентрации S циклинов (Clb5,
Clb6 у Sc и циклин A у позвоночных), который образует S
циклин-Cdk комплекс который напрямую стимулирует ДНК репликацию.
Уровень S циклина остается высоким в течении всей S, G2-фаз
и начала митоза, где помогает началу митозу в некоторых
клетках.
М-циклины (Clb1,2,3 и 4 у Sc, циклин B у позвоночных) появляется
последним. Его концентрация увеличивается, когда клетка
переходит к митозу и достигает максимума в метафазе. М-циклин-Cdk-комплекс
включает сборку веретена деления и выравнивание сестринских
хроматид. Его разрушение в анафазе приводит к выходу из
митоза и цитокиезу.
G1 циклины (Cln3 у Sc и циклин D у позвоночных) помогает
координировать клеточный рост с входом в новый клеточный
цикл. Они необычны, так как их концентрация не меняется
от фазы клеточного цикла, а меняется в ответ на внешние
регуляторные сигналы роста.
APC комплекс (Anaphase-Promoting Complex)
Убиквитин лигаза митоза - APC состоит из 12 субъединиц и регулирует
различные процессы митоза, такие как разделение сестринских
хроматид (запускает разрушение когезинов), переход к анафазе,
анафазное расхождение хромосом, выход из митоза, разрешение
S-фазы. ARC разрушает митотический циклин B.
Имеются различные белки регулирующие активность ARC комплекса,
такие как Mps1, Bub1, Bub3, BubR1, Mad1 и Mad2. Они ингибируют
ARC комплекс, что ведет к остановке клеточного цикла в метафазе
митоза.
Ингибиторы комплексов циклин-Cdk
Вид | Название | Синонимы | Гомологи | Цели, функции |
S. cerevisiae | Sic1 Far1 |
Rum1 нет |
ингибирует S- и M-Cdk, подавляет активность Cdk в G1 ингибирует G1/S–Cdk в ответ на феромоны |
|
S. pombe | Rum1 | Sic1 | ингибирует S– и М–Cdks, подавляет активность Cdk в G1 |
|
D. melanogaster | Roughex/Rux Dacapo/Dap |
нет Cip/Kip |
ингибирует S– и M–Cdk, подавляет активность Cdk in G1 ингибирует G1/S–Cdks, подавляет активность Cdk в G1 |
|
X. laevis | Xic1 | Kix1 | Cip/Kip | ингибирует G1/S– и S–Cdk |
H. sapiens | p21 p27 p57 p15INK4b p16INK4a p18INK4c p19INK4d |
Cip1/Waf1 Kip1 Kip2 - - - - |
Cip/Kip Cip/Kip i Cip/Kip INK4 INK4 INK4 INK4 |
ингибирует G1/S– и S–Cdk, активирует cyclin D–Cdk4 ингибирует G1/S– и S–Cdks, активирует cyclin D–Cdk4 ингибирует G1/S– и S–Cdks, активирует cyclin D–Cdk4 ингибирует Cdk4, Cdk6 ингибирует Cdk4, Cdk6 ингибирует Cdk4, Cdk6 ингибирует Cdk4, Cdk6 |
Помимо циклинов имеются и другие регуляторы, такие как
p27, p53, анафазный ингибитор, Cdc20, polo-like киназа,
aurora киназа, Nek2 киназа и кинезинзависимые моторные белки.
p53 (опухолевый супрессор) - нестабильный
белок, узнает поврежденную ДНК, стабилизируется, накапливается
и стимулирует синтез ингибитора Cdk2. Нарушения в работе
p53 приводят к развитию раковых заболеваний.
p21 семейство - белки содержащие гомологичные
N-концевые участки, взаимодействующие с Cdk-циклинами. Активируются
в стареющих клетках. Образование индуцируется опухолевым
супрессором p53. Может блокировать субъединицы ДНК-полимеразы
p27 - межклеточные контакты стимулируют
его синтез - контактное подавление клеточного роста – задержка
в G0. Когда фибробласты помещаются в чашку они
начинают делиться пока монослой не покроет чашку – контактное
торможение. В опытах показано что существенную роль играют
не контакты, а степень распластывания – чем меньше распластана
клетка, тем больше времени занимает клеточный цикл. Округление
клеток сопровождается снижением общей интенсивности белкового
синтеза.
p57
p15, p16 семейство: взаимодействуют
с Cdk4 и Cdk6. Нарушают связь с циклинами D. Вероятно, задерживают
рост клеток.
Сокращения:
cdc-гены (cell-division-cycle genes) - гены клеточного цикла.